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涂膜耐霉菌性测定法—检验程序及结果

时间:2019-05-23来源:泰鼎恒业浏览次数:

1.检验程序
检验程序的接种过程必须有充分设施保证人员与环境的安全,建议该接种过程在霉菌孢子悬浮液喷雾箱中进行,接种完毕待样品从喷雾箱中取出后需对该喷雾箱消毒(用70%〜75%的乙醇溶液对该喷雾箱喷雾,并用干净的布浸上70%〜75%的乙醇溶液对霉菌孢子悬浮液可能滴落、溅洒或喷雾到的表面擦拭)。
孢子悬浮液接种于样品上有喷洒、涂抹、浸泡三种方式。对水不浸润的漆膜样品不宜选用涂抹、浸泡两种方式;一般漆膜样品都可选用喷洒方式接种,该方式要求具有一定雾粒直径大小的喷洒器;一定大小样品的表面,孢子悬浮液需均匀分布于样品的整个表面。雾粒喷洒到样品表面不应形成明显液滴。每个测试样品需接种1mL左右孢子悬浮液。
(1)培养皿法
①培养基平皿的准备。对于直径小于75mm的样品,选用φ90mm无色玻璃培养皿,对于直径为75〜350mm的样品,选用φ400mm无色玻璃大培养皿。将足够的营养盐培养基倒入适合的无菌培养皿中,培养基厚度为3〜6mm。
②接种
a.试验样品。培养皿中的培养基凝固后,表面放上样品,把准备好的孢子悬浮液均匀接种到整个漆膜样品与周围培养基的表面。待样品表面水分稍干后盖好皿盖。每种样品做3个平行。
b.阳性对照。把试验条件(5)④中准备的无菌过滤纸,分别平放在营养盐培养基上,把准备好的孢子悬浮液均匀接种到整个滤纸与周围培养基的表面,稍干后盖好皿盖。
c.阴性对照。取试验条件(5)⑤3块制备好的漆膜作为阴性对照样品,分别平放在无菌的无机营养盐培养基上,每个样品接上与样品相同 接种量的无菌水,稍干后盖好皿盖。
③培养
a.温度、湿度控制。把已接种的测试样品、阳性对照样品和阴性对照样品放在培养箱中,温度控制在25〜30℃,相对湿度控制在不低于 85%的条件下培养。
b.培养时间。在培养7d后检查阳性对照样品上接种菌的活力,如果在任何一张滤纸上肉眼都看不到霉菌生长,则该试验被认为无效,应重新进行试验。若滤纸上肉眼可清楚看见霉菌生长,则继续培养。培养至28d,检查结果。
(2)悬挂法   对于大件样品、不规则样品,无法用18. 6.16. 6 (1)中培养皿法测试的样品,可以用悬挂法进行检测。
①容器的准备。使用带紧密盖子、能安置样品的玻璃或塑料容器,容器的大小与形状应使得在它内部空间的底部具有足够敞露的水表面, 保证放置的样品有足够的空间,不相互干扰,并保持容器内相对湿度大于85%。
②接种。漆膜试验样品与阳性滤纸对照样品的接种,把准备好的混合孢子悬浮液,接种于整个漆膜试验样品和滤纸的表面,每种样品做3 个平行。
试验条件(5)⑤3块制备好的漆膜作为阴性对照样品,用与试验样品同样的接种方式和相同的接种量对该样品表面加无菌水,做3个
平行。
③样品的放置
a.试验漆膜样品与阳性对照。试验样品与阳性对照样品稍微晾干后,放置在(2) ①容器内,安置方式应确保样品不被水触及或溅到,可以采用悬挂的方式把样品悬挂于容器中,注意样品放置不得互相接触,注明试样编号和试验日期。
b.阴性对照。按照(2)①方法准备的另一容器放置阴性对照样品,以与 (2)③a.同样安置方式,确保样品不被水触及或溅到,可以采用悬挂的方式把样品悬挂于容器中。
④培养
a.温度、湿度控制。把已接种的漆膜试验样品、阳性对照样品和阴性对照样品放在培养箱中,温度控制在25〜30℃,相对湿度控制在不低于85%的条件下培养。
b.培养时间。在培养7d后检查阳性对照样品上接种菌的活力,如果在任何一张滤纸上肉眼都看不到霉菌生长,则该试验被认为无效,应重新进行试验。若滤纸上肉眼可清楚看见霉菌生长,则继续培养。
2.结果观察
试验结束,立即检查样品的外观,必要时对样品进行影像测量。如果试验仅检查直观效果,样品应从培养箱拿出,直接从正面或侧面观察样板表面霉菌、菌体、菌丝生长情况。经检验的样品应先用肉眼检查,如有必要再用放大镜(放大倍数约50倍)进行检查。应按以下等级评定及表述长霉程度,报告应给出试验所采用的培养方法、测试周期。
(1)0级——在放大倍数约50倍下无明显长霉。
(2)1级——肉眼看不到或很难看到长霉,但在放大镜下可明显见到长霉。
(3)2级——肉眼明显看到长霉,在样品表面的覆盖面积为10%〜30%。
(4)3级——肉眼明显看到长霉,在样品表面的覆盖面积为30%〜60%。
(5)4级——肉眼明显看到长霉,在样品表面的覆盖面积大于60%。
同时阴性对照样品肉眼不应观察到霉菌生长。